01

（1）如果培養(yǎng)細(xì)胞未添加抗生素，細(xì)胞污染則是不可避免的。

① 用肉眼和顯微鏡進(jìn)行檢查。

② 如果細(xì)胞被污染則要棄掉。

（2）由于支原體污染不容易覺(jué)察到，因此必須定期檢測(cè)。

（3）檢測(cè)可能污染的途徑和原因。

02

03

（1）復(fù)蘇另一支凍存的細(xì)胞，并且與正在培養(yǎng)的細(xì)胞加以比較。兩種細(xì)胞的培養(yǎng)應(yīng)分開(kāi)，以免在培養(yǎng)之初就產(chǎn)生污染。隨后按（2）～（4）步的方法做排查。

（2）對(duì)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并繪制生長(zhǎng)曲線，與以前培養(yǎng)該細(xì)胞的資料進(jìn)行比較，檢查是否有下列改變:

① 傳代時(shí)是否接種密度過(guò)低。

② 細(xì)胞傳代是否過(guò)于頻繁。

③ 傳代前細(xì)胞平臺(tái)期是否過(guò)長(zhǎng)。

（3）是否更換了胰蛋白酶或其他分離劑的批號(hào)，檢查批號(hào)和供貨商。

（4）是否細(xì)胞分離過(guò)程中嚴(yán)重?fù)p傷了細(xì)胞，應(yīng)檢測(cè):

① 胰蛋白酶（其他消化試劑）消化時(shí)間是否過(guò)長(zhǎng)。

② 消化液的濃度和活性是否過(guò)高、過(guò)強(qiáng)。

③ 胰蛋白酶消化時(shí)，孵箱溫度是否過(guò)高。

④ 吹打消化細(xì)胞時(shí)是否過(guò)于用力。

⑤ 細(xì)胞是否對(duì) EDTA過(guò)于敏感（如果添加了EDTA）。

⑥ 胰蛋白酶稀釋是否有誤。

⑦ 是否使用了一批劣質(zhì)的胰蛋白酶消化液。

溫度設(shè)定不準(zhǔn)

a　自動(dòng)調(diào)溫器損壞。

b　開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。

c　孵箱門(mén)未關(guān)緊。

d　風(fēng)扇損壞造成散熱不均。

孵箱濕度不能維持

a　水盤(pán)中未加水。

b　孵箱有滲漏。

c　開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。

d　在Petri培養(yǎng)皿中放置一定量的PBS，每日稱(chēng)重，以檢查蒸發(fā)率。

孵箱的CO2濃度不準(zhǔn)

a　開(kāi)關(guān)孵箱門(mén)過(guò)于頻繁。

b　CO2控制器出現(xiàn)問(wèn)題。

END